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EdU细胞增殖检测试剂盒

发布时间:2019/8/28 点击次数:245 来源:US EVERBRIGHT INC.

一、细胞增殖直接测定DNA合成常用法

直接测定DNA合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,常用检测法有BrdU检测和新型EdU检测。


BrdU

EdU

原理

 BrdU为胸腺嘧啶衍生物,可与胸苷竞争掺入DNA,再用抗BrdU单抗,经ICC染色,显示增殖细胞。

EdU是一种胸腺嘧啶脱氧核苷类似物,可代替胸苷掺入正在复制的DNA分子中,通过EdU与荧光标记特异性反应快速检测DNA复制活性。

检测分子

很小,BrdU抗体的1/500

检测方式

免疫反应

化学反应

影响其他标记

DNA变性

需要

不需要

实验时间

过夜

2.5h

检测敏感度

一般

灵敏

植物细胞检测

需消化细胞壁,细胞壁消化酶常含杂质,甚至破坏细胞形态表征,降低准确性

无需消化细胞壁即可完成检测,检测便捷准确

优缺点

破坏了DNA双链结构,影响了其他染料的结合染色,出现染色弥散,准确性降低

染料易扩散特异性好,不破坏DNA和核的结构,避免样品损伤,无需抗原抗体反应,可准确反映细胞和组织水平DNA复制活性



BrdU需DNA变性后才能与抗体结合,导致BrdU、Hoechst染色弥散,边缘模糊不清;EdU边缘清晰完整,检测灵敏准确


二、EdU检测原理

EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine),中文名为5-乙炔基-2' -脱氧尿苷,是一种新型胸苷(胸腺嘧啶脱氧核苷,thymidine)类似物,EdU可以在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如YF488/555/594/647)通过一价铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应(Click reaction) 。通过点击反应,新合成的DNA会被相应的荧光探针所标记,运用荧光检测设备(荧光显微镜、流式细胞仪等)检测到增殖的细胞。




三、EdU检测应用

细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪、线粒体活性、动物活体注射等方面的研究,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

EdU应用

详情

动物活体注射实验

EdU适用于各种动物活体注射,稳定无副作用,检测时间可以从几小时至数十天,也适用于石蜡或冰冻组织切片检测,完全满足动物细胞增殖的检测,是全面分析组织或器官细胞增殖的理想工具

植物成像实验

EdU分子小可透过细胞壁,无需DNA变性和抗原抗体反应,可准确检测植物生长发育分化等性状的细胞增殖情况,其适用于各种单/双子叶植物的细胞增殖检测

细胞标记示踪

标记示踪可直观了解细胞在体内的分布,还可追踪其体内的分化转化及调控机制。EdU能竞争性地渗入正在复制的DNA分子,从而达到标记分裂细胞的目的,简单快速准确示踪细胞示踪标记时间长达6,远胜于BrdU

DNA损伤修复检测

代谢活动和环境因素如紫外线等能造成人体细胞DNA分子结构的破坏,进而改变细胞阅读信息和基因编码的方式。DNA损伤修复须经常运行,快速改正DNA结构的任何错误。EdU可快速有效标记,细胞核的荧光强度跟DNA损伤修复活性成正相关

线粒体活性检测

线粒体是动物细胞的一种半自主细胞器,具有自身特异的DNA分子。这类环状双链DNA记载了线粒体的遗传信息。采用EdU可以同时标记线粒体DNA,结合APH即可实现针对线粒体DNA复制活性的检测

病毒增殖活性检测

病毒DNA复制是病毒增殖的一个重要表现,采用EdU方法可快速检测病毒DNA的复制活性,并掌握病毒增殖的位点


四、EdU检测试剂盒特点

YF染料标记多种颜色可选择荧光亮度高光稳定性好,适合做显微镜检测

简单仅需三步:EdU孵育,细胞固定化,荧光检测

快速检测只需2.5 h,大大缩短实验周期

准确标记率高无需变性,更好地保护细胞形态

兼容允许与多种抗体荧光蛋白同时标记,可同时检测细胞其他性状特征

灵敏—YF染料易扩散单个增殖细胞也可准确检测

五、实验图

5.1 显微镜观察

  

         YF®594 Click-iT EdU                                       hoechst核复染                                            Overlay

EdU检测试剂盒可以很好的将处于增殖状态的细胞标记出来


5.2 流式细胞仪

加羟基脲抑制增殖

正常细胞增殖

Hela细胞,10 μM EdU孵育2h。

YF®594 Click-iT EdU可清楚的分离已结合EdU的增殖细胞与未结合EdU的非增殖细胞

六、产品目录

 

货号

产品名称

规格

目录价(RMB

 

E6032-2mg

EdU

2mg

2500

 

E6032-10mg

10mg

3800

 

E6032-50mg

50mg

5100

EdU(细胞成像)

C6015-100T

YF®488 Click-iT EdU Imaging Kits(绿色荧光)

100T

1100

C6015-500T

500T

2200

C6015-1000T

1000T

3600

C6016-100T

YF®555 Click-iT EdU Imaging Kits(橙红色荧光)

100T

1100

C6016-500T

500T

2200

C6016-1000T

1000T

3600

C6017-100T

YF®594 Click-iT EdU Imaging Kits(红色荧光)

100T

1100

C6017-500T

500T

2200

C6017-1000T

1000T

3600

C6018-100T

YF®647A Click-iT EdU Imaging Kits(红色荧光)

100T

1100

C6018-500T

500T

2200

C6018-1000T

1000T

3600

EdU(细胞流式)

C6019-20T

YF®488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(绿色荧光)

20T

1800

C6019-50T

50T

4000

C6020-20T

YF®555 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(橙红色荧光)

20T

1800

C6020-50T

50T

4000

C6021-20T

YF®594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(红色荧光)

20T

1800

C6021-50T

50T

4000

C6022-20T

YF®647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(红色荧光)

20T

1800

C6022-50T

50T

4000



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